Der amerikanische Schauspieler Justin Kirk wurde in Salem, Oregon geboren, wuchs jedoch in Union, Washington auf. Bereits als kleiner Junge wusste Kirk, dass er Schauspieler werden wollte. Nachdem er mit 12 Jahren nach Minneapolis, Minnesota zog, besuchter er mehrere Jahre lang die Children's Theater School.
Nach dem High School Abschluss zog er nach New York, wo er eine zweijährige Ausbildung am Circle in the Square absolvierte und bald darauf sein erstes Engagement am Broadway ergatterte. Nach weiteren Theaterrollen übernahm er 1997 seine erste Filmrolle in „Love! Valour! Compassion!“. In der Sitcom Jack & Jill spielte er zwischen 1999 und 2001 neben Amanda Peet und Jaime Pressly eine Hauptrolle. Es folgten Gastrollen in Serien wie Law & Order: Special Victims Unit (2001), CSI: Crime Scene Investigation (2005) und Everwood (2006). Für Kirks darstellerische Leistungen in der Mini-Serie „Angels in America“ wurde er 2004 mit Nominierungen für den Golden Globe und den SAG Award geehrt und gewann den Satellite Award.
Seit 2005 überzeugt der Schauspieler als Andy Botwin in der Serie Weeds, für die er ebenfalls für den Golden Globe und den SAG-Award nominiert wurde und 2008 den Satellite Award entgegennehmen kann. Justin Kirk dreht weiterhin Filme und ist 2010 und 2011 als wiederkehrender Gastdarsteller in Modern Family zu sehen.
2012 erhält er die Hauptrolle des miesepetrigen Tierarztes George Coleman in der Sitcom Animal Practice, die sich jedoch nicht lange auf Sendung halten kann.
2014 übernimmt Kirk eine Hauptrolle in der ersten Staffel der FX-Serie Tyrant, 2017 steigt er als Hauptdarsteller bei APB ein.
Justin Kirk lebt in New York City und Los Angeles.